네틸마이신(Netilmicin)은 시소마이신(sisomicin)의 1-N-에틸 유도체의 반합성 아미노글리코사이드 계열 항생제입니다. 그람양성균 및 그람음성균에 대해 폭넓은 항균 활성을 나타내며, 주사제 및 안과용 제제로 사용됩니다.

합성 과정 중 가수분해 및 알킬화 반응에 의해 1-N-ethylgaramine, 2’-N-ethyl 및 6’-N-ethyl 유도체 등 다양한 관련물질(related substances)이 생성될 수 있기에 네틸마이신 제제의 품질 관리를 위해서는 주성분뿐 아니라 관련 불순물에 대한 정밀한 분석이 필수적입니다.

 

 본 어플리케이션 노트는 유럽약전(European Pharmacopoeia, EP 8.1 (2014) 및 개정 EP 9.2 (2017))에 수록된 네틸마이신 황산염 관련물질 분석법을 기반으로 수행된 평가 결과를 소개합니다. 특히 EP 9.2에서는 기존 EP 8.1 방법 대비 분리 성능이 개선된 LC 조건과 함께 불순물 허용 기준이 업데이트되었으며, 본 노트에서는 두 방법 모두를 ALEXYS LC-ECD 시스템으로 검증한 결과를 제시합니다.

유럽 약전에 따른 네틸마이신 분석 방법은 이온쌍에 기반한 HPLC 분리 후 컬럼 후 NaOH를 첨가법을 이용하여 강알칼리 조건에서 펄스 전기화학 검출(PAD)을 요구합니다. 네틸마이신과 관련물질은 당 구조를 포함하고 있어 금(Au) 전극 기반 PAD 검출에 매우 적합합니다.

EP 9.2에서는 5 µm 실리카 기반 C18 컬럼을 사용하며, EP 8.1에서는 8 µm 고분자 기반 컬럼을 사용하도록 규정하고 있습니다. 두 방법 모두 전기화학 검출 플로우셀 조건으로 Au working electrode, Ag/AgCl reference electrode, stainless steel auxiliary electrode 구성을 요구합니다.

 

본 분석에 사용된 ALEXYS Aminoglycosides Analyzer는 EP 규정에 부합하는 LC-ECD 전용 시스템으로 다음과 같은 장점을 제공합니다.

• EP 공식 분석 조건(EP 8.1 및 9.2)에 완전 부합하는 LC-EC 구성

• 포스트 컬럼 NaOH 자동 첨가 시스템 내장

• 금 전극 기반 PAD 검출에 최적화된 FlexCell/SenCell 옵션 제공

• 우수한 분리도 및 재현성 확보 (RSD < 2%)

• 높은 신호 대 잡음비 및 안정적인 베이스라인 유지

• 아미노글리코사이드 분석에 특화된 전용 플랫폼

EP 9.2 방법 평가 결과, 불순물 B(1-N-ethylgaramine)와 불순물 A(sisomicin) 간 분리도는 12.9, 불순물 A와 네틸마이신 간 분리도는 6.1로, EP 시스템 적합성 기준(≥10 및 ≥6)을 모두 충족하였습니다. 직선성 시험에서는 상관계수 >0.999를 나타냈으며, 반복성은 RSD <2%로 우수한 정밀도를 보였습니다.

EP 8.1 방법 또한 분리도, 감도(S/N >10), 반복성 요건을 모두 충족하였습니다. 실제 시료 분석 사례에서는 일부 샘플이 EP 불순물 기준을 초과하는 결과도 확인되어, 본 분석법이 상업용 제제의 품질 적합성 평가에 효과적으로 적용될 수 있음을 보여주었습니다.

 결론적으로, ALEXYS Analyzer for Netilmicin은 EP 9.2 및 EP 8.1 공식 방법에 따라 네틸마이신 황산염의 관련물질 분석을 수행하는 데 적합한 재현성 있고 강건한 LC-EC 솔루션입니다. 본 어플리케이션 노트는 제약 품질관리(QC) 및 연구 환경에서 약전 기준에 부합하는 네틸마이신 관련물질 분석을 수행하기 위한 실질적인 적용 사례를 제공합니다.